NDM-5-C208A突变大肠埃希菌的构建及大蒜辣素与NDM-5相互作用位点分析

摘要：

[目的]产新德里金属β-内酰胺酶 5(NDM-5)的革兰阴性耐药菌对人畜健康产生巨大威胁.本文旨在初步探究大蒜辣素对NDM-5的抑制作用及其相关作用位点,为临床开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供理论支持.[方法]通过AutoDock模拟分子对接,预测大蒜辣素与NDM-5的结合位点;构建突变型载体pET21a-NDM-5-C208A,测序验证无误后转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3),通过药敏试验进行突变表型确认;采用微量肉汤棋盘法和时间杀菌曲线测定大蒜辣素与美罗培南对NDM-5突变型细菌的联合抑菌效果.通过体外表达突变蛋白NDM-5-C208A,建立酶活性测定体系,比较大蒜辣素对C208突变型NDM-5和野生型 NDM-5 酶活性的抑制效果.[结果]经测序证实 NDM-5 的 C208A 突变株 BL21(DE3)pET21a-NDM-5-C208A构建成功,C208A突变株恢复了对头孢类和碳青霉烯类抗生素的敏感性,且大蒜辣素与美罗培南联用的联合抑菌指数由 0.375 增加至 2,联用表现为独立作用而非协同作用;体外酶活测定结果显示NDM-5-C208A突变不仅使酶活性下降约 85%,而且该位点突变导致大蒜辣素对NDM-5失去抑制作用.[结论]Cys208 位点是维持NDM-5 水解酶活性的关键位点,且大蒜辣素可通过与该位点结合发挥抑制酶活性的作用.该结果为大蒜辣素作为新型β-内酰胺酶抑制剂的开发和应用提供试验依据.

关键词：大蒜辣素、NDM-5、美罗培南、酶抑制剂

所属期刊栏目：47

分类号：S852.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：江苏省自主创新项目CX223039

在线出版日期：2024-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：61-68