金黄色葡萄球菌及毒素多重实时荧光PCR检测技术及其试剂盒性能测试

摘要：

[目的]本文基于自筛的金黄色葡萄球菌特异性靶基因ASL1804625(sa19)以及2种重要的毒素基因(A型和U型肠毒素,sea344和seu222),建立一种同时检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素的多重实时荧光PCR检测方法.[方法]通过优化引物浓度等因素,确定最适多重实时荧光PCR反应体系,并将此检测体系组装成试剂盒,对人工污染样品和实际样品进行检测.[结果]选用1.5×Syto9 Green作为荧光染料,优化后的反应体系为0.015 U·μL-1 Taq酶,0.10 mmol·L-1 dNTP,终浓度分别为0.05、0.10和0.20μmol·L-1的3对引物.sa19的基因组灵敏度为40.7 pg·μL-1,sea344、seu222的基因组灵敏度均为4.07 pg·μL-1;sa19的菌液浓度灵敏度为1.19×103 CFU·mL-1,sea344、seu222的菌液浓度灵敏度均为1.19×104 CFU·mL-1.构建的试剂盒组内和组间重复率均为100％.在经历60次反复冻融、72 h泡沫箱储藏、-20℃储藏90 d、4℃储藏45 d后,试剂盒检测结果仍没有显著变化,同时具有良好的特异性与抗干扰能力.[结论]本研究针对食源性金黄色葡萄球菌建立的多重实时荧光PCR法,具有快速、特异性强、灵敏度高的优点,并组建成适用于实际检测应用的商品化试剂盒,在食品安全检测方面具有广阔的应用前景.

关键词：金黄色葡萄球菌、毒素基因、多重实时荧光PCR、试剂盒

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分类号：TS207.4(食品工业)

资助基金：国家重点研发计划;江苏省农业自主创新基金项目

在线出版日期：2022-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1258-1265