UV-B胁迫下紫花苜蓿qRT-PCR内参基因的筛选

摘要：

[目的]在植物代谢通路关键调控基因表达的相关研究中,筛选各种条件下合适的内参基因至关重要.[方法]以UV-B为主要胁迫,运用荧光定量PCR技术以及geNorm和NormFinder软件,对不同取样时间(处理后0、1、2和5d)的紫花苜蓿(Medicago sativa L.)幼苗根、茎、叶组织中Actin2、GAPDH、MSC27、18S RNA、-tublin、bZIP、UBQ、PPPrep、Ms03_50f03和Ms03_69f07等候选内参基因表达的稳定性进行研究.[结果]geNorm软件显示:紫花苜蓿幼苗根部UV-B胁迫下MSC27和UBQ的稳定值(M)较小,增加第3个内参基因后变异值(V)基本不变,表明选用2个内参基因即可;茎部则是MSC27和Actin2的M值较小,同时相应的V值也满足要求;而使用M值较小的Actin2和GAPDH为内参,在研究叶片基因表达时可以获得更加准确的结果,当增加第3个内参基因时,V值变大,反而影响结果.同时发现,18S RNA和β-tublin在根和茎叶中的稳定性均较差,因此不适宜作为内参基因使用.NormFinder的结果与上述结果相似,结果差异部分的原因可能是因为算法不同.[结论]在UV-B胁迫下,紫花苜蓿幼苗根部中MSC27和UBQ的表达较为稳定,而在茎部则以MSC27和Actin2为宜,使用Actin2和GAPDH为内参在研究叶片基因表达时可以获得更加准确的结果.本研究对UV-B胁迫下紫花苜蓿中关键基因的定量表达分析具有重要的实用价值.

关键词：紫花苜蓿、实时荧光定量PCR、内参基因、geNorm、NormFinder

所属期刊栏目：38

分类号：Q781(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目31200195,J1210056和J1310015;江苏省自然科学基金青年基金项目BK2012364;教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目20120097120019;南京农业大学青年科技创新基金项目KJ2012022

在线出版日期：2015-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：248-254