鸡肝原代细胞药物代谢模型的建立与优化

摘要：

[目的]建立成年鸡原代肝细胞的药物代谢模型并对其进行优化.[方法]以改进的二步灌流法分离8～12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞,比较在不同细胞基础培养液条件下鸡肝细胞体外培养的情况,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态,利用MTT检测法绘制生长曲线,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,用qPCR和Western blot测定肝细胞中CYP450酶亚型CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和3种酶蛋白的表达量.[结果]离体灌流操作简便,获得的细胞存活率高达90％以上;用含0.5 mg·L-1牛胰岛素、10 g·L-1双抗(100 U·mL-1青霉素和链霉素)和体积分数为10％胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝细胞,贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程,贴壁后呈上皮细胞样生长,多角形,胞浆内容物均匀丰富,细胞核清晰透亮,少数有双核,细胞生长状态良好.生长曲线和LDH活性测定结果显示:培养3～5d时细胞状态稳定,并且在肝原代细胞培养的8d内,CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和蛋白的表达量没有显著差异.[结论]以改进的二步灌流法分离鸡肝细胞操作简便,分离的鸡肝原代细胞存活率高,用含0.5 mg·L-1胰岛素、100 U·mL-1青霉素、100 μg· mL-1链霉素和10％胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝原代细胞效果最好,培养3～5d是进行体外药物代谢等试验的最佳时机.

关键词：成年鸡、离体灌流、鸡肝细胞、药物代谢模型、优化

所属期刊栏目：38

分类号：S859.1(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2015-02-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：127-133