山羊血管紧张素转换酶2基因的克隆表达与生物信息学分析

摘要：

[目的]血管紧张素转换酶2(ACE2)是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能.[方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到pMD19-T载体并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行验证后测序分析.根据测序分析结果设计引物,经PCR扩增和酶切连接,构建原核表达载体pET-28a-ACE2,经过验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达ACE2蛋白.[结果]山羊ACE2基因cDNA编码区共包括2 415个核苷酸,编码804个氨基酸残基.同源性比对发现,山羊ACE2基因核苷酸序列同源性与绵羊ACE2最高,为99％,与斑马鱼最低,仅为60％.遗传进化分析也表明该ACE2基因与绵羊的遗传距离最近,与斑马鱼处在两个不同的分支上.蛋白结构及理化性质分析预测该山羊ACE2蛋白属于稳定型蛋白,蛋白信号肽序列位于第1氨基酸(aa) ～18氨基酸(aa)之间,蛋白跨膜螺旋预测为Ⅰ型跨膜蛋白.成功构建山羊ACE2蛋白胞外部分(19～738 aa)表达载体,表达出的蛋白相对分子质量约为90× 103,主要以包涵体的形式在BL21 (DE3)中表达.[结论]本试验首次成功克隆了山羊ACE2基因编码区(基因序列号:KF921008.1),并对其蛋白结构及理化性质进行了初步预测,同时在大肠杆菌中高效表达了其胞外区蛋白.

关键词：山羊、血管紧张素转换酶2、基因克隆、生物信息学、表达

所属期刊栏目：38

分类号：S852.23(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目30871838

在线出版日期：2015-02-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：120-126