马铃薯甲虫3个烟碱型乙酰胆碱受体α亚基基因的克隆及表达分析

摘要：

通过克隆马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)基因的全长序列并分析其时空表达量差异,为马铃薯甲虫nAChR亚基功能以及对新烟碱类药剂靶标抗性机制的研究提供重要基础.根据马铃薯甲虫转录组数据,采用RACE克隆技术获得3个马铃薯甲虫nAChR α基因的cDNA全长序列;通过相似性和进化树分析验证这3个基因的亲缘关系;利用实时荧光定量PCR技术分析这些基因在马铃薯甲虫不同发育阶段和成虫不同部位的表达情况.本试验验证并获得3条nAChR α亚基片段序列,经BLAST比对得出其分别属于nAChRα4、nAChR α7和nAChR α9亚基,进一步克隆得到这些基因的全长序列,分别命名为Ldα4、Ldα7和Ldα9.3个亚基基因编码的氨基酸序列与已知的昆虫同源序列有较高的相似性.其中Ldα4、Ldα7和Ldα9与赤拟谷盗的相似性最高,分别为87％、89％和47％;Ldα4、Ldα7和Ldα9亚基基因在马铃薯甲虫成虫中主要集中于头部和胸部,在蛹期、幼虫和成虫中均有表达,但表达量有明显差异,Ldα4、Ldα7和Ldα9分别在成虫、3龄幼虫和蛹期阶段的表达量最高.克隆获得的3个基因Ldα4、Ldα7和Ldα9具备nAChR α基因的典型结构特征,且与赤拟谷盗的相应基因位于同一分支,进一步验证了同为鞘翅目昆虫的亲缘关系.Ldα4、Ldα7和Ldα9亚基基因在马铃薯甲虫不同生长阶段的表达量有差异,推测这些亚基基因在马铃薯甲虫的不同生长发育中发挥特定作用.

关键词：马铃薯甲虫、烟碱型乙酰胆碱受体、基因克隆、序列分析、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：37

分类号：S435.32(病虫害及其防治)

在线出版日期：2014-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：65-71