10.7685/j.issn.1000-2030.2013.06.010
鸡骨钙素蛋白的原核表达及其生物学活性
为获得具有生物活性的骨钙素蛋白,以鸡颅骨提取的总RNA为模板,RT-PCR法克隆鸡骨钙素成熟肽DNA,连接至原核表达载体pET-32a(+),构建表达质粒pET-32a(+)-rchOC.质粒转化Rosetta-gami(DE3) pLyS宿主菌,IPTG诱导表达含His标签的重组蛋白His-rchOC.肠激酶酶切去除融合蛋白中的His标签后获得重组骨钙素蛋白(rchOC).通过与羟基磷灰石结合试验、MTT及PNPP法分析该蛋白生物学活性.结果显示:重组骨钙素蛋白能与羟基磷灰石结合,抑制成骨细胞中碱性磷酸酶的表达,但不影响成骨细胞的增殖.结论:经原核表达系统已成功获得鸡重组骨钙素蛋白,且该蛋白具有生物活性.
鸡、骨钙素、pET-32a(+)、Rosetta-gami(DE3) pLyS、蛋白表达、羟基磷灰石、成骨细胞
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S831(家禽)
国家自然科学基金项目30972234,30671546,31272618;江苏省普通高校研究生科研创新项目CXZZ11-0681;江苏高校优势学科建设工程资助项目
2014-03-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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