砂梨ACC合酶cDNA全长克隆及其反义与正义表达载体构建

摘要：

为构建干扰砂梨(Pyrus pyrifolia Nakai)ACC合酶基因表达的遗传转化载体,利用RACE技术从'早生新水'成熟果实cDNA中克隆了ACC合酶的cDNA,该cDNA全长为1 939 bp,命名为Pyp-ACS,GenBank登录号为EF566865.Pyp-ACS核苷酸序列含有5′末端非翻译区109 bp、1 488 bp完整的开放阅读框和3′末端非翻译区342 bp(含25 bp的Ploy+(A)).Pyp-ACS编码495个氨基酸,与白梨(Pyrus×bretschneideri Rehd.)、西洋梨(Pyrus communis L.)、中国李(Prunus salicina Lindl.)、桃(Prunus persica(L.)Batsch)、梅(Prunus mume Seib.et Zucc.)、苹果(Malus×domestica Borkh.)和柿(Diospyros kaki Thunb.)有较高的同源性.该氨基酸序列具备ACC合酶7个保守区和组成该酶活性中心的12个氨基酸残基,即SLSKDMGFPGLR,进一步验证了克隆的正确性.以pYPX145载体为基础,分别将Pyp-ACS编码区序列反向和正向插入相应位点构建反义和正义表达载体,并分别命名为pPyp-ACS(-)和pPyp-ACS(+),目的基因由双35S启动子所控制.分别将这2个表达载体导入根癌农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)EHA105,为耐贮藏转基因梨的遗传转化提供载体.

关键词：砂梨、ACC合酶、cDNA、反义/正义表达载体

所属期刊栏目：31

分类号：S661.2(果树园艺)

资助基金：江苏省高新技术研究项目BG2006313

在线出版日期：2009-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：25-31