猪γ干扰素的基因克隆、改造、表达及活性测定

摘要：

提取经ConA诱导培养的猪外周血白细胞总RNA,RT-PCR扩增出猪IFN-γ基因并克隆到pGEM-T-easy载体,测序结果表明扩增片段是含有信号肽的猪IFN-γ的完整基因.设计1对引物亚克隆猪IFN-γ成熟蛋白基因并对其5′端前2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造.经测序鉴定后插入原核表达载体pRLC,并实现在大肠杆菌中的高效表达.表达产物以包涵体形式存在,经7 mol@L-1盐酸胍的变性液溶解及0.5 mol@L-1盐酸胍复性液复性处理,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化.细胞病变抑制法测定结果表明,重组猪IFN-γ具有较高的干扰素活性,约为4.5×106U.mg-1.

关键词：猪γ 干扰素、基因改造、原核表达、分离纯化

所属期刊栏目：26

分类号：Q786;S859.79+7(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2003-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：71-75