重组刺桐胰蛋白酶抑制剂的制备及活性鉴定

摘要：

刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,能够抑制胰蛋白酶及组织型纤溶酶原激活剂的活性,因此ETI可以作为配体与固定相偶联用于亲和层析.利用化学合成及聚合酶链式反应(PCR)的方法获得ETI的编码基因,然后用NdeⅠ/SacⅠ酶切并插入载体pET25b(+)中构建重组表达质粒pET25b(+)/ETI.重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导使重组ETI(rETI)过量表达形成包涵体.包涵体经过洗涤、复性及CM离子交换柱纯化,每升培养液可获得14 mg rETI,其纯度超过92%.活性测定表明,rETI对凝血酶及尿激酶的活性没有抑制作用,但能显著抑制胰蛋白酶、瑞替普酶及纤溶酶的活性,抑制常数Ki分别为5.14×10-9,9.4×10-8和2.08×10-8mol/L.

关键词：刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)、胰蛋白酶、瑞替普酶、纤溶酶、抑制

所属期刊栏目：41

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2008-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：462-469