肠出血性大肠杆菌O157∶H7的快速可视化检测

摘要：

目的 应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphtholblue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7快速可视化检测方法.方法 针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度.结果 本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应；体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果.结论 建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测.

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7、可视化检测、环介导等温扩增、羟基萘酚蓝

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分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：江苏省科技支撑计划社会发展项目BE2012609;国家重大传染病专项课题2013ZX10004-103、2013ZX10004-218;南京军区重点课题10Z038、10Z040;全军后勤科研"十二五"重大项目AWS11C001、AWS11C009;南京军区重点课题11Z040

在线出版日期：2013-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：321-324