酶消化法分离培养原代肺动脉平滑肌细胞及免疫组化鉴定

摘要：

目的：建立体外胶原酶消化法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞( PASMCs)及免疫鉴定的方法。方法采用I型胶原酶对PASMCs进行体外培养。在无菌环境下,分离提取雄性Sprague Dawley( SD)大鼠肺动脉主干,剥离外膜、剔除内皮细胞,经酶消化法,体外培养PASMCs。倒置相差显微镜观察PASMCs生长状态及特点；台盼兰测定细胞活力；免疫细胞染色法进行平滑肌α-肌动蛋白(α-SM actin)鉴定。结果酶消化法分离培养的PASMCs 3 d后,可见细胞贴壁呈梭形生长,6 d后生长迅速呈典型的峰-谷状生长,9 d后达90‰融合。通过形态学观察及免疫荧光染色法鉴定表明：培养的细胞为PASMCs；细胞存活率为98.5‰；原代培养8~10 d后即可传代,3-10代细胞生长迅速、细胞形态不易发生改变,可用于进行细胞实验。结论采用I型胶原酶消化法简单易行、可靠、PASMCs生长迅速、传代周期短的特点；尤为重要的是,培养的原代PASMCs可用于肺动脉高压和肺血管重构的研究工作。

关键词：酶消化法、大鼠肺动脉平滑肌细胞、免疫细胞化学、SD大鼠

分类号：R563(呼吸系及胸部疾病)

资助基金：湖南省教育厅科研项目13C837;湖南省科技厅项目2014FJ3016

在线出版日期：2015-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：78-81