基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立

摘要：

鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1785 bp,编码594个氨基酸.该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将pORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合成的截短ORF65(truncated ORF65)插入pET32a(+)载体,构建了pET32a-trunORF65;进一步采用DNAstar、ABCpred、BepiPred 1.0软件预测了pORF65的5个B细胞表位优势区段,以合成的截短ORF65为模板,通过SOE-PCR将5个B细胞表位优势区段编码序列融合后插入pET32a(+)载体,构建了pET32a-modORF65.重组质粒分别转入BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,SDS-PAGE和West-ern-blot分析,pET32a-modORF65获得高效表达,表达的融合蛋白分子量为56.4 kD.此外,利用rProtein G亲和层析纯化了锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)血清IgM,免疫小鼠,制备了鼠抗锦鲤IgM多克隆抗体.在上述研究的基础上,将纯化的pORF65作为包被抗原,鼠抗锦鲤IgM多克隆抗体作为检测抗体,建立了间接ELISA方法,该方法可以检测pEGFP-ORF65 DNA疫苗免疫锦鲤后产生的特异性抗体.

关键词：鲤疱疹病毒3型、ORF65、B细胞表位融合表达、rProteinG亲和层析、ELISA、抗体特异性检测

所属期刊栏目：14

分类号：S917.1(水产基础科学)

资助基金：国家自然科学基金项目31402347;广东省科技计划项目2016A020210029;广州市科技计划项目201707010216;广东省海洋与渔业厅渔港建设和渔业产业发展专项A201701C04

在线出版日期：2018-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：113-119