HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立

摘要：

目的建立一种简便、准确、实用的乙型肝炎病毒(HBV)耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法. 方法根据已公布的HBV DNA序列,在HBV 多聚酶基因区设计并合成了两对寡核苷酸引物,其中一只为错配引物;应用巢式错配聚合酶链反应(PCR)特异性扩增含有HBV多聚酶基因YMDD基序的片段,扩增产物用限制性内切酶(NdeⅠ)酶切,琼脂糖凝胶电泳,观察酶切后目的片段的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱.部分标本进行DNA测序. 结果 (1)所建立的巢式错配PCR-RFLP法,从DNA提取到酶切后电泳分析仅需要11小时;灵敏度高,可以检测到103copies/ml的HBV DNA;特异性强,结果准确,经DNA测序证实.(2)检测20例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清,发现YMDD变异者(45%)9例,YMDD野毒株者(55%)11例,表明该法可有效地鉴别HBV YMDD野毒株与变异株. 结论本实验所建立的用于检测HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异的巢式错配PCR-RFLP方法简单、敏感、特异,适用于一般实验室及大规模的人群调查.

关键词：肝炎病毒、乙型、拉米夫定、聚合酶链反应/方法

所属期刊栏目：14

分类号：R394-33

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：346-348