m6A甲基化转移酶3在糖尿病性白内障发病中的作用机制

摘要：

目的:探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化转移酶3(METTL3)在糖尿病性白内障发病中的作用机制.方法:用低糖和高糖培养基培养人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)24h 后,采用 RT-qPCR 和 Western blot 实验检测细胞的上皮-间质转分化(EMT)指标:E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)、紧密连接蛋白1(ZO-1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化情况;transwell和划痕实验检测细胞迁移能力.采用免疫荧光染色检测人晶状体前囊膜组织中METTL3的表达量及定位,m6A dot blot实验检测在低糖和高糖培养基中培养24h细胞的m6A甲基化水平,RT-qPCR和Western blot实验检测细胞中METTL3的RNA和蛋白表达量.加入METTL3抑制剂的培养基中培养24h的细胞,RT-qPCR和Western blot实验检测EMT指标的变化情况;m6A dot blot实验检测细胞m6A甲基化水平;Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力.免疫荧光染色检测细胞中转化生成因子β(TGFβ1)的表达;RT-qPCR和Western blot实验检测细胞中的TGFβ1和SNAIL的表达量.结果:与低糖条件相比,高糖条件能够促进细胞EMT的发生,促进METTL3的表达和上调了细胞总RNA的m6A甲基化水平(P＜0.05).高糖能够促进细胞的迁移能力.糖尿病性白内障患者晶状体前囊膜中METTL3表达较单纯年龄相关性白内障患者增高.与高糖+DMSO组相比,加入METTL3抑制剂STM2457,能够抑制细胞的EMT发生,抑制TGFβ1和SNAIL的表达,抑制细胞总RNA的m6A甲基化水平(均P＜0.05).加入METTL3抑制剂STM2457后细胞迁移能力较高糖+DMSO组降低.结论:m6A甲基化转移酶METTL3通过激活TGFβ1/SNAIL通路促进了在高糖条件下人晶状体上皮细胞的EMT发生从而诱导糖尿病性白内障的发生.

关键词：糖尿病性白内障、甲基化转移酶3(METTL3)、N6-甲基腺嘌呤(m6A)、上皮-间质转分化

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在线出版日期：2023-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1250-1259