miR-519d-3p靶向HIF-1α抑制高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞功能障碍及血管生成

摘要：

目的:明确miR-519d-3p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)功能障碍与血管生成的影响,并阐明其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的调控机制.方法:通过 5、30mmol/L葡萄糖分别诱导HRMEC建立正常(NG)和高糖(HG)细胞模型.将HRMEC分为对照组(HG细胞模型转染阴性对照模拟物)、甘露醇组(对照组加入25mmol/L甘露醇)、miR-519d-3p过表达组(HG细胞模型转染miR-519d-3p模拟物)、miR-519d-3p联合HIF-1α过表达组(HG细胞模型共转染miR-519d-3p模拟物和HIF-1α过表达载体).实时荧光定量PCR法检测各组miR-519d-3p的表达情况.Western blotting法检测各组HIF-1α蛋白的表达情况.荧光素酶报告基因实验检测 miR-519d-3p 和 HIF-1α 的结合位点情况.CCK-8法检测各组细胞增殖情况.Hoechst 33342 染色法检测各组细胞凋亡情况.ELISA法检测各组细胞外液炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6 蛋白的表达情况.小管形成实验检测各组新生毛细血管管腔样结构形成情况.结果:与NG相比,HG细胞模型中miR-519d-3p表达显著减少,而HIF-1α蛋白表达显著增加(均P<0.01).与对照组比较,miR-519d-3p过表达组中HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.01).miR-519d-3p中"CGUGAAA"序列可以与HIF-1α 3'-非编码区(3'-UTR)中"GCACUUU"序列特异性结合.与对照组比较,miR-519d-3p过表达组细胞24、48、72h吸光度值均显著增加,细胞凋亡率显著减少,细胞外液TNF-α、IL-1β、IL-6 浓度均显著减少,新生毛细血管管腔样结构数量显著减少(均 P<0.01).与miR-519d-3p过表达组比较,miR-519d-3p联合HIF-1α过表达组细胞24、48、72h吸光度值均显著减少,细胞凋亡率显著增加,细胞外液TNF-α、IL-1β、IL-6 浓度均显著增加,新生毛细血管管腔样结构数量显著增加(均P<0.01).对照组和甘露醇组中上述各指标比较无差异(均 P>0.05).结论:高糖诱导HRMEC模型中miR-519d-3p表达下调,而HIF-1α蛋白表达上调.HIF-1α是miR-519d-3p的靶基因,miR-519d-3p靶向HIF-1α增加细胞增殖并降低细胞凋亡和炎症反应,从而减轻高糖诱导的HRMEC功能障碍并抑制血管生成.

关键词：miR-519d-3p、高糖、人视网膜微血管内皮细胞、功能障碍、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)

所属期刊栏目：23

分类号：R5;R285.5;R737.9

在线出版日期：2023-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1087-1092