细菌内同源重组法构建LEDGFp52基因腺病毒载体及体外表达

摘要：

目的:构建表达人类晶状体来源的上皮生长因子p52(LEDGFp52)重组腺病毒载体,检测LEDGFp52重组腺病毒能否在真核细胞中有效表达目的基因.方法:将LEDGFp52基因片段亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52,将腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生携带LEDGFp52基因的重组腺病毒载体pAd-LEDGFp52,将pAd-LEDGFp52经脂质体法转化293细胞包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52,将Ad-LEDGFp52体外转染293细胞,CPE法及westernblot观察目的基因的表达.结果:构建了表达LEDGFp52基因的重组腺病毒质粒,E.coli内成功同源重组腺病毒,在293细胞内包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52,滴度可达5×1012 pfu/L.在真核细胞中有效表达目的基因LEDGFp52,出现显著的CPE效应.结论:成功构建表达LEDGFp52的重组腺病毒载体,为进一步进行LEDGF p52基因功能的研究提供了实验基础.

关键词：LEDGFp52基因、腺病毒载体、体外表达

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分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：979-983