脂多糖通过NLRP3诱导并促进慢性鼻窦炎人鼻黏膜上皮细胞焦亡

摘要：

目的 革兰氏阴性菌能够诱发并加重慢性鼻窦炎(CRS)炎症反应,但病理机制有待进一步证实,而细胞焦亡被证实与细菌性炎症反应密切相关,因此本研究重点探讨来源于革兰氏阴性菌的关键成分脂多糖(LPS)是否能够通过诱导并加剧CRS患者鼻黏膜上皮细胞焦亡来促进CRS的炎症进展.方法 利用临床上对照组和CRS组患者的鼻黏膜组织,采用IHC检测焦亡相关蛋白的表达.提取并培养正常原代人鼻黏膜上皮细胞(N-HNEpCs)和CRS原代人鼻黏膜上皮细胞(CRS-HNEpCs).随后将2种细胞分为4组(对照组、LPS 1 mg/L组、LPS 5 mg/L组和LPS 25 mg/L组);CCK-8检测细胞存活率,EthD-I荧光染色结合GSDMD检测细胞焦亡,免疫荧光技术、Western blot、RT-qPCR检测炎性介质IL-18、IL-1β和NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1)的表达.结果 IHC显示CRS患者鼻黏膜组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达相较对照组显著增加(P＜0.01).体外实验结果表明,不同浓度的LPS刺激均可降低N-HNEpCs和CRS-HNEpCs的存活率(P＜0.05),并可增加EthD-I荧光染色阳性细胞数和焦亡关键蛋白GSDMD的表达(P＜0.05),且呈现出剂量依赖关系;免疫荧光技术、Western blot和RT-qPCR结果均显示5 mg/L LPS刺激后,N-HNEpCs和CRS-HNEpCs内炎性介质IL-18、IL-1β和NLRP3炎症小体的表达显著上调(P＜0.05).结论 LPS可通过激活NLRP3炎症小体从而触发正常原代人鼻黏膜上皮细胞焦亡,并可进一步促进CRS原代人鼻黏膜上皮细胞焦亡进展,提示革兰氏阴性菌可能通过诱发鼻黏膜上皮细胞焦亡从而引起并加剧CRS病变.

关键词：脂多糖、革兰氏阴性菌、细胞焦亡、慢性鼻窦炎、NLRP3

所属期刊栏目：39

分类号：R765.4(耳鼻咽喉科学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;广州市科学技术局基础与应用基础研究项目

在线出版日期：2023-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：409-419