高表达AhR的RAW264.7细胞株的构建及对炎症细胞因子调控的研究

摘要：

目的 构建稳定高表达芳香烃受体(AhR)的小鼠RAW264.7细胞株,观察AhR对脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞炎症细胞因子表达的影响.方法 构建含AhR-Flag-EGFP基因的慢病毒重组质粒载体并获得病毒上清,感染RAW264.7细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达的单克隆细胞株,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测绿色荧光蛋白表达情况,qRT-PCR和Western blot法验证AhR基因及蛋白水平表达情况.qRT-PCR和ELISA检测LPS刺激后炎症细胞因子的表达情况.结果 获得1株稳定高表达AhR的RAW264.7细胞,荧光显微镜和流式细胞仪显示其荧光率达100％,qRT-PCR和Western blot结果表明RAW/AhR稳转组相对于RAW/Vector空转组,AhR的mRNA和蛋白水平明显上调(P＜0.05).LPS刺激后炎症相关细胞因子表达升高,相对于空转组,稳转组的促炎细胞因子IL-6、IL-1β的表达更低(P＜0.05),抗炎细胞因子IL-10的表达更高(P＜0.05).结论 成功构建稳定表达AhR的RAW264.7单克隆细胞株,证实了AhR对LPS刺激的巨噬细胞炎症反应具有负性调控作用,为后续进一步研究巨噬细胞中AhR的免疫调节及其他功能奠定基础.

关键词：芳香烃受体、RAW264.7、稳定表达、细胞因子

所属期刊栏目：33

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金;第三军医大学成果转化基金;国家重点实验室开放基金

在线出版日期：2018-01-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1082-1087