巴马香猪CD74分子蛋白表达与免疫活性分析

摘要：

目的 体外表达巴马香猪CD74蛋白,制备抗CD74抗体,进行蛋白免疫活性分析,为进一步阐明CD74分子结构和功能奠定基础.方法 应用RT-PCR扩增CD74基因,定向插入到表达载体pET-22b多克隆位点,转化BL21(DM3)感受态细胞进行诱导表达;提取与纯化目的蛋白,免疫Balb/c小鼠,制备CD74抗体,ELISA方法测定制备的CD74抗体效价及免疫反应性;Western blot、免疫荧光分析CD74蛋白免疫活性.结果 RT-PCR扩增出约645 bp的CD74目的基因,编码215位氨基酸,具有典型的Ⅱ型跨膜糖蛋白分子结构和类似其他CD74分子功能结构域;构建pET-22b-CD74转化BL21感受细胞,经IPTG诱导的目的蛋白以可溶性形式获得有效表达,SDS-PAGE检测到Mr约37 800的目的蛋白条带;经His亲和层析纯化,获得纯度达90％以上目的CD74蛋白;以纯化的CD74蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,经3次免疫后用ELISA测定制备的CD74抗体效价可达1:5 120;Western blot分析表明,表达的CD74蛋白与CD74抗体有强显色反应;免疫荧光检测显示,制备的CD74抗体与体内天然表达CD74分子具有良好免疫反应性,其荧光信号主要存在内膜系统,证实巴马香猪CD74具有类似其他物种CD74分子定向锚钉细胞内膜系统功能特性.结论 本试验进行了巴马香猪CD74蛋白表达及蛋白免疫活性分析,制备了具有良好免疫活性的CD74抗体,为进一步开展猪CD74免疫功能研究及基于CD74靶向性新型疫苗设计奠定基础.

关键词：巴马香猪、CD74、蛋白表达、免疫活性

所属期刊栏目：32

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省自然科学基金ZR2013CQ006

在线出版日期：2016-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：584-588