H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗的构建与鉴定

摘要：

目的 构建H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽的真核表达载体并检测其在293T细胞中的表达,并鉴定疫苗抗肿瘤效应.方法 筛选鉴定H-2Kb限制性WTI蛋白CTL表位9肽,设计并合成肽疫苗核酸序列,插入pUC57载体,经酶切和测序鉴定,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)及pEGFP-N1载体,转染293T细胞,RT-PCR鉴定目的基因的转录,共聚焦显微镜鉴定目的基因的表达.构建pcDNA3.1(+)-WT1免疫小鼠,取小鼠脾细胞进行体外特异CTL杀伤FBL3细胞试验.结果 构建的基因疫苗经测序、双酶切及PCR鉴定确认无误;其携带的目的基因可在293T细胞中表达.免疫小鼠后特异CTL对FBL3杀伤结果高于对照组(P＜0.05).结论 成功构建了H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗,载体疫苗能在真核细胞中成功表达,疫苗特异CTL具有体外杀伤肿瘤细胞功能,为提高WT1肽疫苗的抗肿瘤效应提供了新思路.

关键词：H-2Kb限制性、WT1蛋白、CTL、肽表位、基因疫苗

所属期刊栏目：31

分类号：R730.51(肿瘤学)

资助基金：山西省科技攻关项目20140313011-18

在线出版日期：2015-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：404-407