10.13431/j.cnki.immunol.j.20140148
支原体巨噬细胞活化脂肽-2经Btk/PI3K/Nrf2通路诱导单核细胞表达HO-1
目的 观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(hemeoxygenase,HO-1)的分子机制.方法 体外培养THP-1细胞,用5 ng/ml的MALP-2刺激12h.Real-time PCR检测HO-1 mRNA的表达,Western blot检测其蛋白水平及Akt磷酸化;THP-1细胞与不同浓度的Bruton”酪氨酸激酶(Bruton”s tyrosine kinase,Btk)抑制剂LFM-A 13作用1h,随后用MALP-2刺激12 h,Western blot观察其对HO-1表达以及Akt磷酸化的影响;分别采用EMSA和免疫荧光检测核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位,并观察PI3K抑制剂LY294002对Nrf2的激活和DNA结合活性的改变情况;siRNA干扰Nrf2表达,以证实其在HO-1表达中的作用;最后,采用LFM-A13和血红素处理THP-1细胞,MTT法检测细胞的存活率.结果 MALP-2处理可显著诱导THP-1细胞表达HO-1蛋白和mRNA,LFM-A13处理后,HO-1表达水平随其浓度的增高而降低;同时,LFM-A13也能抑制MALP-2诱导PI3K的激活(Akt磷酸化).MALP-2能促进Nrf2的核转位并增强其DNA结合活性,而PI3K抑制剂LY294002处理后可抑制Nrf2的激活;RNA干扰Nrf2表达后,HO-1表达显著降低;此外,LFM-A13也可降低血红素处理后THP-1细胞的存活率.而采用HO-1激动剂CoPP诱导后,THP-1细胞的存活率有所增高.结论 MALP-2通过Btk/PI3k/Nrf2诱导THP-1细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用.
支原体巨噬细胞活化脂肽-2、Bruton’酪氨酸激酶、血红素氧合酶-1、单核细胞
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R392.9
国家自然科学基金31000091,81072418;湖南省高校科技创新团队湘教通”2010”212号;湖南省研究生培养创新基金湘教通”2008”249号
2014-09-17(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
677-680