日本七鳃鳗IL-17基因原核表达、蛋白纯化及多抗制备与鉴定

摘要：

目的 从日本七鳃鳗(Lampetra japonica,Lj)类淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增七鳃鳗IL-17基因,并对其氨基酸序列进行分析.方法 将IL-17基因连接到原核表达载体pET-28a上,成功构建了重组表达质粒pET-28a-Lj-IL-17;经IPTG诱导表达并纯化重组Lj-IL-17蛋白.用重组Lj-IL-17蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体进行ELISA与Westernblot检测.结果 经ELISA检测抗体效价为1:512 000,Western blot结果显示该多克隆抗体能特异性结合重组和天然IL-17蛋白.流式细胞实验证明该多抗能特异识别七鳃鳗类淋巴细胞表达的IL-17分子.结论 重组Lj-IL-17蛋白表达及多克隆抗体的成功制备,为研究日本七鳃鳗适应性免疫起源与进化提供了重要的工具.

关键词：日本七鳃鳗、IL-17、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：30

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2014-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：636-640,649