二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定

摘要：

目的 为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性.方法 将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化.间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用.结果 成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1％甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L.SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右.通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95％以上.ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合.CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4％.划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移.结论 研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性.

关键词：bFGF、ds-Diabody、毕赤酵母、肺癌细胞

所属期刊栏目：30

分类号：R392.11

在线出版日期：2014-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：550-554