大鼠TNFR-Fc重组腺相关病毒载体的构建、表达及中和活性鉴定

摘要：

目的 构建携带大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区(TNFR)融合大鼠IgG Fc片段的重组2型腺相关病毒载体(pAAV2/TNFR-Fc),并对目的蛋白TNFR-Fc的表达和生物学活性进行初步鉴定,为后续的类风湿关节炎基冈治疗研究做准备.方法 构建大鼠TNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染293T细胞,收集转染上清,以ELISA和Western blot等方法检测目的蛋白的表达,并应用L929细胞测定重组表达产物的TNF-α细胞毒中和活性.结果 成功构建重组表达载体pAAV2/TNFR-Fc,在转染细胞上清中检测到目的蛋白TNFR-Fc的表达,其可有效中和大鼠TNF-α的L929细胞毒活性.结论 成功构建了大鼠TNFR-Fc融合基因,并验证了其在2型AAV载体上的分泌性表达,为进一步病毒包装及动物实验奠定了基础.

关键词：类风湿关节炎、TNFR-Fc、重组腺相关病毒载体、中和活性

所属期刊栏目：29

分类号：R593.22(全身性疾病)

资助基金：北京市自然科学基金资助项目7132145

在线出版日期：2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：992-996