超敏CRP单克隆抗体制备及其ELISA体系的初步建立
目的 获得CRP特异性单克隆抗体并建立能够检测超敏CRP(hs-CRP)的双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法.方法 从NCBI核酸数据库中获得人CRP编码序列并进行密码子偏嗜性改造,利用E.coli表达系统表达CRP重组蛋白.用pET22b-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-22b)作为免疫原免疫Balb/c小鼠并通过杂交瘤技术制备CRP特异性单克隆抗体,鉴定并筛选能够建立双抗体夹心ELISA系统的抗体配对.以pET28a-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-28a)作为标准品,对该系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行分析和评价.结果 获得5株CRP单克隆抗体,筛选得到2株单克隆抗体可用于hs-CRP的ELISA免疫检测.通过鉴定2株抗体具有良好的效价和特异性.ELISA检测系统线性范围为0～166 ng/ml,灵敏度为5.2 ng/ml,批内CV≤6.43％,批间CV≤5.93％,平均回收率为98.9％,与Orion公司hs-CRP诊断试剂检测结果有良好的可比性.结论 本研究制备了高效特异的CRP单克隆抗体并建立了能够检测hs-CRP的双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够达到hs-CRP的检测要求,为进一步研发和建立具有自主知识产权的免疫检测试剂盒及其他检测方法体系奠定了良好的基础.
超敏C-反应蛋白、蛋白原核表达、单克隆抗体、ELSIA、方法学评价
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R446(诊断学)
2013-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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