尼罗罗非鱼血清免疫球蛋白单克隆抗体制备及鉴定
目的 制备抗尼罗罗非鱼血清免疫球蛋白的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定,运用它们监测嗜水气单胞菌免疫尼罗罗非鱼血清抗体水平.方法 采用重组蛋白A亲和层析法纯化尼罗罗非鱼血清免疫球蛋白,纯化蛋白经SDS-PAGE检测后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合；用ELISA法对杂交瘤进行筛选以及测定单抗的特性和效价,Western blot和叠加ELISA分析单抗的抗原结合表位；灭活嗜水气单胞菌免疫尼罗罗非鱼,用单抗建立ELISA检测体系监测血清特异性抗体水平.结果 SDS-PAGE电泳条件下血清免疫球蛋白重链和轻链的相对分子质量分别约为77 000和27 000;共获得4株抗罗非鱼血清Ig的单抗,分别命名为3D9、9D4、8G3和7B7,它们的细胞上清ELISA效价为1∶3 200～1∶6 400,抗体Ig亚类均为IgG1；4株单抗都能特异识别罗非鱼免疫球蛋白,而与鲫、草鱼、南方鲇、斑点叉尾(鲴)、鲈鱼血清无任何交叉反应.3D9识别变性条件下的尼罗罗非鱼Ig重链,9D4、8G3和7B7为轻链特异性.初次免疫后1～15 d尼罗罗非鱼血清中嗜水气单胞菌特异性抗体水平显著上升,第3次免疫后3周抗体水平达到峰值.结论 成功制备抗尼罗罗非鱼血清免疫球蛋白单克隆抗体,为尼罗罗非鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等研究提供有力工具.
尼罗罗非鱼、免疫球蛋白、单克隆抗体、嗜水气单孢菌
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Q813.2(生物工程学(生物技术))
西南大学基本科研业务费专项基金项目XDJK2012C082
2013-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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