肺炎链球菌蛋白PspA诱导人类单核细胞生产炎症介质和趋化因子的研究
目的 原核表达肺炎链球菌表面的毒性蛋白(pneumococcal surface protein A,PspA)并加入到人类单核细胞的培养基中,检测该蛋白对人类单核细胞释放炎性细胞因子和趋化因子的影响.方法 将重组质粒pET-32a(+)/PspA转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导重组菌表达TRx-His-PspA融合蛋白并纯化；通过肠激酶切掉融合蛋白的TRx-His部分,获得PspA蛋白.再将PspA蛋白加入到人类单核细胞的培养基中共孵育,ELISA检测培养基上清中IL-6、TNF-α、IL-1β、CXCL8、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5浓度的差异；最后,将放线菌素D或者放线菌酮也加入到细胞培养基中,ELISA方法检测其对PspA蛋白促单核细胞合成炎性细胞因子的干预作用.结果 重组菌表达TRx-His-PspA融合蛋白相对分子质量约为70000,纯化后用肠激酶切除融合蛋白的TRx-His部分,获得PspA蛋白(相对分子量为50 000)；ELISA试验表明PspA蛋白刺激人类单核细胞后,单核细胞系合成和释放到培养基上清的IL-6、CXCL8、CCL2、CCL4和CCL5显著增加(P＜0.05)；而加入了放线菌素D或者放线菌酮后,PspA蛋白刺激人类单核细胞释放IL-6、CXCL8、CCL2、CCL4和CCL5的能力明显减弱.结论 重组的PspA蛋白可以诱导人类单核细胞重新合成和分泌炎性细胞因子IL-6和趋化因子CXCL8、CCL2、CCL4、CCL5,揭示了天然免疫的效应细胞—单核细胞和肺炎链球菌致病因素之间的关系,将有助于制定新的战略来控制肺炎链球菌侵入性疾病.
肺炎链球菌、单核细胞、IL-6、CCL2、CCL4
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R378.14(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2013-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
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