分化诱导剂PMA对THP-1源性巨噬细胞膜表面受体MD-2表达的影响
目的 探索豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对诱导分化后THP-1细胞膜表面受体髓样分化蛋白-2(MD-2)表达和分布的影响及其与炎症因子TNF-α、IL-6分泌的关系.方法 采用PMA梯度剂量(0、1、5、10、50、100 ng/ml)诱导THP-1细胞48 h后观察贴壁细胞形态并计算贴壁率；实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测贴壁细胞膜表面受体MD-2、CD14 mRNA相对表达量,ELISA检测细胞培养上清中分泌性MD-2(sMD-2)、TNF-α和IL-6的分泌水平；进一步通过Western blot检测贴壁细胞的MD-2蛋白表达、激光扫描共聚焦显微镜观察MD-2在贴壁细胞的分布和定位.结果 梯度PMA剂量(1～100 ng/ml)48 h成功诱导悬浮THP-1细胞贴壁；激光扫描共聚焦显微镜观察显示PMA诱导后MD-2主要表达于胞膜和胞浆,诱导质量浓度增加对MD-2的表达和分布均无显著影响；RT-qPCR检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1～100 ng/ml)诱导后MD-2和CD14 mRNA相对表达量较诱导前均显著升高(P＜0.01),诱导剂量组之间无显著差异(P＞ 0.05)；ELISA检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1～100 ng/ml)诱导后,细胞培养上清中的TNF-α、IL-6分泌水平依次显著增加(P＜0.01),sMD-2仅诱导前后有明显统计学差异(P＜0.01)；Western blot检测显示梯度剂量PMA诱导后细胞内MD-2蛋白表达较诱导前显著增加,诱导剂量组之间无显著差异.结论 1～100 ng/ml PMA均可将THP-1细胞诱导分化为成熟巨噬细胞,增加诱导质量浓度可显著提高炎症因子TNF-α、IL-6的分泌水平,但对其膜表面受体MD-2表达和分布无明显影响.
巨噬细胞、膜受体、髓样分化蛋白-2、炎症因子
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R392.9
国家自然科学基金81171848,30700289
2013-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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