抗人NGAL单克隆抗体的制备及其定量检测方法的建立

摘要：

目的 获得抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)特异性单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法.方法 通过杂交瘤技术制备了抗人NGAL高亲和力高特异性单克隆抗体,筛选能够结合天然NGAL的单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA系统.以重组人NGAL为检测对象,对系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行全面分析和评价.通过对肾病患病组和对照组尿液标本检测初步研究其在临床上的分析性能.结果 获得了8株能稳定分泌抗人NGAL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,筛选得到F2和G2两株单克隆抗体可用于双抗夹心ELISA免疫检测.本方法线性范围为0～40 ng/ml,灵敏度为4.8 ng/ml,批内变异CV≤10.04％,批间变异CV≤9.76％,平均回收率为101.9％.临床标本检测显示肾病组与对照组有显著差异(P＜0.01).结论 本研究制备了高亲和力特异性单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够检测体液标本中的天然NGAL蛋白,检测结果与临床基本符合,为其临床应用和推广奠定了基础.

关键词：NGAL、单克隆抗体、双抗体夹心ELISA、临床应用

所属期刊栏目：29

分类号：R446(诊断学)

资助基金："863"计划重点项目2011AA02A113

在线出版日期：2013-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：50-54