肠道病毒71 VP1基因的原核表达及其抗血清的制备

摘要：

目的 克隆并表达重组肠道病毒71(EV71) VP1基因,进行抗血清的制备并检测抗血清效价.方法 利用原核表达系统将PCR获得的VP1片段构建成原核表达载体pET32a(+)-VP1,诱导其表达VP1融合蛋白并利用包涵体纯化方法进行重组蛋白的纯化,将纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备VP1抗血清,ELISA检测抗体效价.同时构建真核表达载体,利用其在真核细胞中的瞬时表达检测抗血清的特异性.结果 通过克隆获得VP1原核表达载体,IPTG诱导VP1蛋白表达并纯化,SDS-PAGE结果显示重组蛋白表达且纯化浓度较高,将重组蛋白乳化后免疫新西兰兔3次,取血检测抗血清的效价,ELISA结果显示抗体效价为1∶64 000,利用所构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-VP1表达VP1对抗血清进行检测,Western blot结果表明抗血清可较好的与VP1特异性结合.结论 制备具有免疫原性的VP1蛋白及其效价较高的抗血清,为进一步研究抗EV71诊断方法、血清学诊断试剂盒及抗病毒疫苗的研制奠定基础.

关键词：肠道病毒71、VP1、抗血清、抗体效价

所属期刊栏目：29

分类号：R181.2(流行病学与防疫)

资助基金：国家自然科学基金31272586;国家转基因重大专项2009ZX08007-006B,2011ZX08007-002,2011ZX08008-004;山东省青年自然科学基金项目ZR2010ZR029;山东省自然科学基金ZR2010CM012;济南市高校院所主创新计划201004027

在线出版日期：2013-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：38-42