早孕因子分离纯化方法的优化

摘要：

目的 对正常早孕妇女血清中早孕因子(EPF)的分离纯化过程进行优化,以提高EPF的回收率.方法 依次采用DEAEFast Flow离子交换色谱和Heparin Fast Flow亲和色谱,从妊娠12周内的正常早孕妇女混合血清中提纯EPF,采用活性玫瑰花结抑制试验(Ea-RIT)检测各阶段产物的EPF活性,SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳鉴定纯化物并测定其相对分子质量,用Western blot鉴定其特异性.结果 经Ea-RIT检测后,DEAE Fast Flow离子交换色谱所现2峰中DE-Ⅰ峰为EPF活性峰,Heparin Fast Flow亲和色谱所现2峰中H-Ⅱ峰为EPF活性峰.H-Ⅱ峰收集液经SDS-PAGE电泳,结果显示为1条相对分子质量为38100的蛋白带,Western blot分析表明抗体与抗原匹配性良好.经检测其蛋白含量为0.615 mg,回收率为0.034％,与传统分离纯化四步法的回收率相比明显提高.结论 本优化方法对于提纯孕血清中的EPF是可行的,大大提高了纯化效率.

关键词：早孕因子、分离纯化、优化

所属期刊栏目：28

分类号：R392.2

资助基金：广东省科技计划重点项目2008A030201022

在线出版日期：2013-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1073-1076