携带microRNA-383重组慢病毒的包装及其上调PBMCs中Foxp3mRNA的表达
目的 包装携带microRNA-383(miR-383)的重组慢病毒,并观察其对正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear ce11s,PBMCs)中Foxp3 mRNA转录的影响.方法 将4个串联的miRNA-383前体序列亚克隆人慢病毒转移载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen,构建重组载体,命名为pHAGE-miR-383.将pHAGE-383、包装质粒psPAX2与包膜质粒pMD2.G共转染入HEK293T细胞进行重组慢病毒包装.进而分别采用定量PCR和RT-PCR检测慢病毒miR-383和Mock感染48 h后细胞中的miR-383的表达和转录因子Foxp3 mRNA的转录水平.结果 定量PCR证实携带miR-383的重组慢病毒包装成功,滴度为1×10(7)TU/ml.以MOI为5的慢病毒感染HEK293T细胞后miR-383表达明显增多.RT-PCR结果显示,miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的表达.结论 成功包装出含有miR-383前体序列的重组慢病毒,而且慢病毒miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的转录水平,为进一步研究其对调节性T细胞的调控作用奠定基础.
慢病毒、microRNA-383、PBMCs、Foxp3 mRNA
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R593.2(全身性疾病)
江苏省高等学校自然科学研究项目09KJD310012
2012-01-07(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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