MMP-13基因真核表达载体的构建及其功能研究
为了研究MMP-13蛋白在瘢痕形成的作用,我们构建MMP-13基因真核重组表达质粒,检测并鉴定了MMP-13基因在转染了重组质粒的皮肤角质形成细胞HaCat中的表达.通过RT-PCR方法将MMP-13基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建其真核表达重组质粒pcDNA3.1 (+)/MMP-13,基因测序鉴定.重组质粒以阳离子脂质体2000介导转染HaCat细胞,RT-PCR检测外源基因的表达,间接免疫荧光和Western blot检测外源蛋白的表达.以明胶酶谱法和MTT法分别检测MMP-13的活性以及其对HaCat细胞增殖的影响.通过RT-PCR检测到MMP-13基因在重组质粒转染后的HaCat细胞中大量表达,以间接免疫荧光反应和Western blot可检测到MMP-13蛋白在在重组质粒转染后的HaCat细胞中呈阳性,明胶酶谱法和MTT法检测显示真核表达质粒pcDNA3.1 (+)/MMP-13表达的MMP-13蛋白具有活性,并且可以抑制HaCat细胞的增殖.构建的重组质粒pcDNA3.1(+)/MMP-13能在Hacat细胞中表达活性蛋白MMP-13,并可以抑制HaCat细胞的增殖,这为研究MMP-13在瘢痕形成中的作用奠定了基础,从而为瘢痕治疗提供有效靶标.
MMP-13、重组质粒、HaCat细胞、瘢痕
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R622(整形外科学（修复外科学）)
2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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