HIV-1Tat调控MCAK基因启动子活性及作用位点的鉴定

摘要：

目的 研究HIV-1 Tat对MCAK启动子活性及基因表达的抑制作用,并鉴定Tat与MCAK启动子的作用位点.方法 利用原核表达的Tat蛋白处理A549细胞,通过Western印迹技术验证HIV-1Tat对MCAK基因表达的抑制作用;构建MCAK启动子-荧光素酶载体,转染A549细胞,通过荧光素酶活性分析Tat对启动子活性的调控作用;运用染色质免疫沉淀法(CHIP)分析Tat与MCAK启动区的相互作用,并进一步通过凝胶阻滞实验(EMSA)确定Tat与MCAK启动区的结合位点.结果 Western印迹实验证实Tat对MCAK表达具有强烈的抑制作用;荧光报告质粒检测系统分析表明在Tat存在的情况下,MCAK的核心启动子活性受到明显的抑制,其效应具有明显的剂量依赖性;CHIP和EMSA实验确定Tat蛋白与MCAK基因启动子区的直接相互作用,MCAK基因-337-232区域存在Tat蛋白的结合位点.结论 HIV-1 Tat对MCAK基因表达具有强烈的抑制作用,并与Tat蛋白结合于MCAK启动区-337～-232区域,从而导致MCAK启动子活性降低有关.

关键词：HIV-1 Tat、MCAK、染色质免疫沉淀、电泳迁移位移试验

所属期刊栏目：27

分类号：R392.11

资助基金：国际原子能机构合作项目;国家自然科学基金;四川省卫生厅科研项目

在线出版日期：2011-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：211-214