FHR4抗体的制备与初步鉴定

摘要：

目的 制备Complement factor H4(FHR4/CFHL4)多克隆和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法 以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-FHR4和PET-32a-FHR4.GST-FHR4融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,作为免疫原制备兔多抗和鼠单抗.采用ELISA法和Western blot鉴定抗FHR4兔抗血清在重组蛋白和天然蛋白中的特异性.采用蛋白印迹,间接免疫荧光,免疫组化鉴定mAb的特异性.结果 GST-FHR4融合蛋白在相对分子质量约58 000处呈现明显表达条带.Western blot鉴定表明,制备的抗FHR4兔多克隆抗体可特异地识别成人肝总蛋白中相对分子质量约37 000和45 000的FHR4蛋白.获得2株可稳定分泌抗FHR4的杂交瘤细胞株可识别重组人FHR4蛋白,同时可特异性结合HepG2细胞浆中的蛋白和成人肝脏组织肝细胞浆中的蛋白.结论 成功制备出兔抗人FHR4抗血清和2株抗FHR4的mAbs,为进一步研究FHR4的功能奠定了基础.

关键词：Complement factor H4、原核表达、多克隆抗体、单克隆抗体

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分类号：R392.11

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）;国家科技支撑计划;国家自然科学基金;国家重点实验室基金

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1043-1047