幽门螺杆菌分子内佐剂三价疫苗的构建、纯化及活性研究

摘要：

目的 构建幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白基因napA、黏附素hpaA、尿素酶B亚单位活性功能片段ureB414与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB)的分子内佐剂三价融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础.方法 利用分子克隆技术构建携带napA-hpaA-ureB414-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-NHUL,转化E.coli BL21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用HK 26/60 Superdex-75分子筛和亲和层析柱Chelating Sepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Western blot鉴定,GM1-ELISA检测rNHUL与神经节苷脂的结合.口服免疫Balb/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性.结果 重叠延伸PCR扩增出了约1 590 bp的NHUL融合基因;其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致.重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的25%,Tris-Tricine初步测定目的蛋白的Mr约59 000,纯化后纯度大于90%.Western blot检测其具有良好的抗原性.该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性.动物实验表明,多亚单位疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG、IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显著高于单一亚单位疫苗.结论 所获得重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础.

关键词：幽门螺杆菌、中性粒细胞激活蛋白、大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位、疫苗、分子内佐剂

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分类号：R392-33

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2003AA215020;国家重大科技专项基金2003AA2Z3C64

在线出版日期：2006-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：690-693,697