小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β和Ret蛋白融合基因的克隆、表达与纯化

摘要：

目的 构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β(murine macrophage inflammatory protein 1β,mMIP-1β)与原癌基因RET的融合基因并构建融合基因mMIP-RET的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达.方法 用RT-PCR方法分别扩增mMIP1β和RET的基因片段,利用分子克隆的方法 将这两个片段用铰链GGIPG连接,并克隆到表达载体pET22b中.双酶切且测序正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达pET22b mMIP1β-RET/His融合蛋白的菌株.经IPTG诱导表达后,ProBond Resin进行亲和层析纯化,然后纯化产物进行复性及超滤浓缩.结果 成功克隆mMIP1β和RET基因片段;成功地构建了pET22b mMIP1β-RET/His融合蛋白原核表达载体,在大肠杆菌中获得表达,并对表达产物进行了纯化,和Western blot鉴定.结论 成功制备高纯度mMIP1β-Ret/His融合蛋白,为进一步研究修饰的肿瘤抗原的生物学功能奠定了基础.

关键词：基因克隆、融合蛋白、表达、纯化

所属期刊栏目：22

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30471978

在线出版日期：2006-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：566-569