人乳头瘤病毒11型DNA中CpG基序甲基化状态分析及生物活性的研究

摘要：

目的对人乳头瘤病毒11型全核苷酸序列的CpG基序(CpG motifs)进行分析,为阐明尖锐湿疣的发病机制和提高DNA疫苗的效能奠定理论基础.方法对从pBR322-HPV11重组质粒上酶切下来的HPV11全长DNA进行计算机分析,包括分类、计数和定位;并用限制性内切酶PCR法分析HPV11 DNA中CpG基序的甲基化状态,即分别用甲基化敏感的限制性内切酶AccⅡ、HaeⅡ和HpaⅡ对HPV11 DNA进行酶切消化,再以HpaⅡ切割位点侧翼序列为引物,以HpaⅡ酶切产物为模板,用聚合酶链反应(PCR)扩增HPV11 DNA片断,并用HPV11 DNA刺激表达有pCIneo-TLR9的HEK293细胞,ELISA法检测TNF-al-pha、IFN-alpha和IL-12的分泌.结果CpG的"C"的侧翼为两个嘌呤,"G"的侧翼为两个嘧啶,在HPV11中共14个.HPV11全基因组被AccⅡ切成2个片断、被HasⅡ切成3个片断、被HpaⅡ切成5个片断,而且以HpaⅡ酶切产物为模板进行PCR扩增,未能得到相应的片断.HPV-11 DNA刺激有人TLR9表达的HEK293细胞后能检测到TNF-alpha、IFN-alpha和IL-12的分泌.结论乳头瘤病毒11型DNA中含有GACGTT等非甲基化的CpG基序,而且具有免疫原性.

关键词：人乳头瘤病毒11型、CpG基序、核苷酸序列分析、限制性内切酶PCR法

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分类号：R759.03;R373(皮肤病学与性病学)

资助基金：国家自然科学基金30400386;重庆市科技攻关项目01-6647

在线出版日期：2005-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：29-32,36