MAGE-3基因真核表达载体构建及在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

摘要：

目的扩增人黑色素瘤抗原-3(Melanoma antigen 3,MAGE-3)基因,构建真核表达载体,并在小鼠黑色素细胞瘤B16中进行表达.方法采用PCR扩增MAGE-3基因,连接到真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞.G418筛选阳性克隆,荧光显微镜和RT-PCR分别检测阳性克隆中增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达和MAGE-3 mRNA的表达.结果从pUC19/MAGE-3重组质粒中扩增获得一条约950bp的片段,成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见融合蛋白表达产生明亮的绿色荧光,RT-PCR检测到MAGE-3 mRNA的表达.结论成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,获得了稳定表达该载体的小鼠黑色素瘤B16细胞系,为研究MAGE-3在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了基础.

关键词：黑色素瘤抗原3、基因转染、绿色荧光蛋白、基因表达

所属期刊栏目：20

分类号：R735(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30271464;军队医药卫生科研项目012084

在线出版日期：2004-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：350-352,356