κ、λ轻链C区基因的克隆与表达

摘要：

目的利用pBAd/gⅢA表达载体和大肠杆菌Top 10克隆和表达κ、λ轻链C区基因片段,探索生物工程技术制备小分子抗原的可行性.方法经RT-PCR从正常人的外周血淋巴细胞mRNA中扩增出κ、λ轻链恒定区基因,限制性双酶切后分别克隆到同样酶切的pBAd/gⅢA质粒中,转化大肠杆菌.酶切鉴定与PCR法筛选出阳性克隆菌株,经Arabinose诱导表达出κ、λ轻链片段.Ni2+-NTA亲和层析纯化后,以150 mg/mL SDS-PAGE与Western blot鉴定纯化产物,并测定蛋白的相对浓度.结果SDS-PAGE与Western blot结果显示,纯化后的产物在Mr16 000处呈致密的单一条带,与克隆基因表达产物的相对分子质量一致,该带经HRP标记的羊抗人IgG Fab抗体证实为抗体片段成分.结论κ、λ轻链C区基因的pBAd/gⅢA表达在技术上是可行的,该原核系统表达的片段具抗原性,为后续的开发应用打下了基础.

关键词：pBAd/gⅢA、κ基因序列、λ基因序列、表达、纯化、免疫印迹

所属期刊栏目：19

分类号：R392.116

在线出版日期：2004-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：394-396