10.3969/j.issn.1000-8861.2001.01.006
应用重组PCR技术构建人单链白细胞介素12融合基因
目的 构建人单链白细胞介素12(hscIL-12)融合基因并在真核细胞中进行表达,为进一步研究hscIL-12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法 应用重组PCR技术将hIL-12p40和p35亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3碱基序列进行前后拼接(IL-12 p40-多肽接头-p35),构建hscIL-12融合基因,并进行核苷酸序列测定,进一步将hscIL-12融合基因插入pcDNA3.1真核表达载体中,转染COS-7细胞表达hscIL-12融合蛋白,并行Western blot分析。结果 该融合基因经DNA序列分析表明:p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确,融合基因可在COS-7细胞中表达hscIL-12融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白分子量为70000u,可与鼠抗人IL-12 p40/p70单克隆抗体特异性结合。结论 重组PCR技术是十分有效、可靠的体外基因重组方法。
重组PCR、人白细胞介素12(hIL-12)、人单链白细胞介素12(hscIL-12)、融合基因
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R392.11
陕西省自然科学基金99SM49
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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