应用重组PCR技术构建人单链白细胞介素12融合基因

摘要：

目的 构建人单链白细胞介素12（hscIL-12）融合基因并在真核细胞中进行表达，为进一步研究hscIL-12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法 应用重组PCR技术将hIL-12p40和p35亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头（Gly4Ser）3碱基序列进行前后拼接（IL-12 p40-多肽接头-p35），构建hscIL-12融合基因，并进行核苷酸序列测定，进一步将hscIL-12融合基因插入pcDNA3．1真核表达载体中，转染COS-7细胞表达hscIL-12融合蛋白，并行Western blot分析。结果 该融合基因经DNA序列分析表明：p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确，融合基因可在COS-7细胞中表达hscIL-12融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白分子量为70000u，可与鼠抗人IL-12 p40／p70单克隆抗体特异性结合。结论 重组PCR技术是十分有效、可靠的体外基因重组方法。

关键词：重组PCR、人白细胞介素12(hIL-12)、人单链白细胞介素12(hscIL-12)、融合基因

所属期刊栏目：17

分类号：R392.11

资助基金：陕西省自然科学基金99SM49

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：22-26