大麦cDNA-AFLP技术体系的优化及其应用
为构建适合分析大麦杂种优势的cDNA-AFLP技术体系,以4个大麦不育系、2个大麦恢复系以及按4×2配制的8个杂交种为材料,对影响大麦cDNA-AFLP技术体系的几个关键因素进行了研究。结果表明,大麦cDNA-AFLP技术按以下程序可得到多态性好的清晰条带：使用百泰克公司的TRIpure Reagent总RNA提取试剂可提取到高质量的叶片总RNA;用TaKaRa的M-MLV RTase反转录合成双链cDNA;用MseⅠ和EcoRⅠ酶切6h,再用T4连接酶15℃连接接头18h;预扩PCR反应的dNTP终浓度为0.2mmol.L-1,扩增20循环效果最好;预扩产物稀释20倍后进行选择性扩增,最终用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离条带。利用该cDNA-AFLP体系对参试杂交种及其亲本的谱带类型进行了分析,亲本与杂种之间共扩增出7种类型的谱带,分别是共同表达型（P1P2F1）、P1表达型（P1）、P2表达型（P2）、F1表达型（F1）、P2F1表达型（P2F1）、P1F1表达型（P1F1）和P1P2表达型（P1P2）。其中差异谱带类型可分为四种表达模式：（1）单亲显性表达型,包括P2F1表达（P2F1）和P1F1表达（P1F1）;（2）单亲沉默表达型,包括仅P1表达（P1）和仅P2表达（P2）;（3）杂种上调表达型,即仅F1表达（F1）;（4）杂种下调表达型,即仅P1P2表达（P1P2）。
大麦、cDNA-AFLP、体系、差异谱带
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S512.3;S330(禾谷类作物)
国家自然科学基余项目31071407,31128014,30971779;国家大麦青稞产业技术体系建设专项＇ARS05;江苏省高校重大自然科学基金项目11KJA210002
2012-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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