核桃不同时期叶片及不同组织RNA提取方法筛选

摘要：

[目的]针对核桃组织中富含多酚、多糖及黄酮类物质含量较高的特点,筛选经济高效、适合核桃不同发育时期叶片及不同组织总RNA的提取方法.[方法]以核桃幼嫩、成龄和衰老叶片为材料,分别采用改良硼砂—CTAB法、改良硼砂—CTAB—异丙醇法、改良SDS法、改良Trizol法Ⅱ以及试剂盒法进行总RNA的提取.以筛选与优化的改良硼砂—CTAB法、改良硼砂—CTAB—异丙醇法分别提取核桃胚、叶柄、韧皮部、雄花的总RNA,并对RNA产量、纯度、电泳图谱和RT-PCR进行分析.[结果]5种方法都可获得核桃总RNA,其中,改良硼砂—CTAB法能够从幼嫩叶片、成龄叶片、叶柄和雄花中获得质量高、完整性好的总RNA,28SrRNA 亮度约为 18SrRNA 的2倍,A260/A280介于1.9?2.1 之间,A260/A230 大于2.0,且总RNA质浓度可达1 185.2 ng·μL-1;改良硼砂—CTAB—异丙醇法则适合衰老叶片、胚和韧皮部的提取,总RNA质量浓度可达1 019.0 ng ·μL-1.通过RT-PCR在不同组织中均能扩增出核桃18SrRNA和翻译起始因子(JreIF1A)片段.[结论]改良硼砂—CTAB法和改良硼砂—CTAB—异丙醇法相比其他3种方法更易排除蛋白质、酚类等杂质干扰,对于不同时期不同组织均有更好的适用性,提取所获得的总RNA纯度和浓度完全符合后续的分子生物学试验要求.

关键词：核桃、总RNA、CTAB法、SDS法、Trizol法

所属期刊栏目：33

分类号：S727.3;S718.46(造林学、林木育种及造林技术)

资助基金：河南省自然科学基金项目182300410092

在线出版日期：2021-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：57-64