基于毛细管电泳的日本落叶松MSAP反应体系的建立

摘要：

[目的]建立基于毛细管电泳的日本落叶松最佳MSAP反应体系,获得条带清晰,信号强度均一的DNA甲基化图谱,为今后开展日本落叶松表观遗传变异研究奠定基础.[方法]以日本落叶松未成熟木质部为试材,设置不同梯度的DNA模板用量以及选择扩增体系中引物浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和exTaq DNA聚合酶浓度,确定各组分不同用量对毛细管电泳效果的影响,从而确立最适的MSAP反应体系.[结果]结果表明模板DNA以及exTaq DNA聚合酶浓度对毛细管电泳结果影响不明显,而高的引物浓度会引起条带的减少.Mg2+及dNTP浓度是影响毛细管电泳结果最为关键的因素,浓度过低或过高会导致毛细管电泳图谱条带明显减少,杂峰显著增多.[结论] 最终确立的反应体系为:DNA 模板100 ng,引物0.75 pmol·μL-1,Mg2+ 2 mmol·L-1,dNTP 0.375 mmol·L-1和exTaq DNA聚合酶 0.05 U·μL-1.

关键词：DNA甲基化、甲基化敏感扩增多态性(MSAP)、毛细管电泳、体系建立、日本落叶松

所属期刊栏目：30

分类号：S791.223(森林树种)

资助基金：林业公益性行业科研专项经费重点项目20150414

在线出版日期：2017-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：361-367