红椿SRAP反应体系优化及引物筛选

摘要：

[目的]优化相关序列扩增多态性（SRAP）体系内的不同组分，建立适用于红椿 SRAP 分子标记的反应体系，并进一步从 SRAP 引物组合中筛选出稳定、多态性好的引物组合，为红椿遗传多样性研究奠定试验基础。[方法]针对SRAP-PCR 反应体系中5个因素各设置8个水平，先利用单因素试验确定浓度梯度，后在确定的梯度范围内选定4个水平，按照正交试验 L16（45）进行优化，结合正交直观分析法和新复极差法对各因素进行优化筛选。[结果]确定最优体系为总体系25μL，模板 DNA 25 ng，上下游引物各0．3μmol·L －1，Taq DNA 聚合酶1U，Mg2＋2．5 mmol· L －1，dNTP 0．3 mmol·L －1。利用稳定的 SRAP-PCR 体系，从1505对 SRAP 引物组合中筛选出30对优质引物组合。[结论]通过不同种源红椿基因组 DNA 的重复验证，获得了稳定清晰、多态性较强的扩增条带，表明所确定的最优体系稳定可靠，适用性较强，可用于不同种源红椿遗传多样性研究的后续实验。

关键词：红椿、SRAP 分子标记、反应体系、引物筛选

所属期刊栏目：30

分类号：S817.46(普通畜牧学)

资助基金：国家林业局林业公益性行业科研专项201004020。

在线出版日期：2017-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：10-17