松材线虫 Bxpel2基因的克隆及 RNA 干扰载体构建

摘要：

[目的]为了构建松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）果胶酶 Bxpel2基因干扰载体。[方法]通过 Trizol 法提取松材线虫总 RNA，反转录合成 cDNA，设计带 T7启动子的果胶酶 Bxpel2基因引物，以 cDNA 为模板扩增出果胶酶Bxpel2基因片段，连接到 RNA 干扰载体，再以干扰载体为模板，PCR 扩增出目的片段后进行测序鉴定，合成果胶酶Bxpel2基因双链 RNA（dsRNA），采用 RT-PCR 检测松材线虫 Bxpel2基因干扰后的表达情况。[结果]表明：1）提取的松材线虫总 RNA 完整性好，无降解；2）成功克隆出松材线虫果胶酶 Bxpel2基因片段（790 bp）并将其连接至 pMD19-T 载体；3）以 RNA 干扰载体为模板合成 dsRNA，浓度分别为1．313 mg·mL －1和1．152 mg·mL －1；4）RT-PCR 结果显示，松材线虫经过 dsRNA 干扰后，Bxpel2基因表达基本受到抑制。[结论]成功构建松材线虫果胶酶 Bxpel2基因干扰载体，为进一步研究 Bxpel2基因在松材线虫致病过程中的作用和功能奠定了良好的基础。

关键词：松材线虫、Bxpel2 基因、RNA 干扰

所属期刊栏目：29

分类号：S763(森林保护学)

资助基金：国家“十二五”科技支撑专题“南方松林重大病虫综合控制技术集成与示范”2012BAD19B0703

在线出版日期：2016-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：283-288