10.3969/j.issn.1001-1498.2016.02.021
松材线虫 Bxpel2基因的克隆及 RNA 干扰载体构建
[目的]为了构建松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)果胶酶 Bxpel2基因干扰载体。[方法]通过 Trizol 法提取松材线虫总 RNA,反转录合成 cDNA,设计带 T7启动子的果胶酶 Bxpel2基因引物,以 cDNA 为模板扩增出果胶酶Bxpel2基因片段,连接到 RNA 干扰载体,再以干扰载体为模板,PCR 扩增出目的片段后进行测序鉴定,合成果胶酶Bxpel2基因双链 RNA(dsRNA),采用 RT-PCR 检测松材线虫 Bxpel2基因干扰后的表达情况。[结果]表明:1)提取的松材线虫总 RNA 完整性好,无降解;2)成功克隆出松材线虫果胶酶 Bxpel2基因片段(790 bp)并将其连接至 pMD19-T 载体;3)以 RNA 干扰载体为模板合成 dsRNA,浓度分别为1.313 mg·mL -1和1.152 mg·mL -1;4)RT-PCR 结果显示,松材线虫经过 dsRNA 干扰后,Bxpel2基因表达基本受到抑制。[结论]成功构建松材线虫果胶酶 Bxpel2基因干扰载体,为进一步研究 Bxpel2基因在松材线虫致病过程中的作用和功能奠定了良好的基础。
松材线虫、Bxpel2 基因、RNA 干扰
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S763(森林保护学)
国家“十二五”科技支撑专题“南方松林重大病虫综合控制技术集成与示范”2012BAD19B0703
2016-05-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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