国槐苯丙氨酸解氨酶基因的克隆、反义表达载体构建及遗传转化

摘要：

根据其它植物PAL基因的保守区域,设计一对兼并引物,采用RT-PCR方法从国槐中克隆了一个长866 bp的PAL基因片段,命名为SjPAL.序列分析发现SjPAL多肽与其它植物的PAL氨基酸序列高度同源(87%以上),且包含与水稻和拟南芥的PAL类似的活性位点.系统进化树分析表明SjPAL与豆科植物的PAL亲缘关系较近.RT-PCR结果显示,SjPAL在根和茎的表达量约为叶中的3倍.利用反义RNA技术将SjPAL基因克隆至植物表达载体pBI121,构建了SjPAL反义RNA植物表达载体pBI121-PAL,通过根癌农杆菌EHA105将其导入拟南芥基因组,对获得的抗性植株进行PCR鉴定、Northern杂交分析、PAL活性分析以及总多酚含量和类黄酮含量分析.结果表明,该反义RNA已整合到拟南芥基因组中,转基因拟南芥的PAL基因表达量、单位材料PAL活性、总多酚含量和类黄酮含量均显著低于野生型对照.本研究为下一步利用该基因反义表达载体转化国槐,通过调节酚类物质含量提高其在再生体系中的生根能力提供了试验依据.

关键词：国槐、生根能力、PAL基因、反义表达载体、遗传转化、总多酚、类黄酮

所属期刊栏目：21

分类号：S718.46(林业基础科学)

资助基金：教育部新世纪优秀人才支持计划NCET-04-0746;湖北省教育厅重大项目Z200627002;湖北省自然科学基金2002AB094;湖北省青年杰出人才基金2003AB 014

在线出版日期：2008-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：611-618