竹花叶病毒福州分离物基因组序列分析及其侵染性克隆的构建
[目的]研究 BaMV福州分离物 BaMV-TMS1及其携带的卫星 RNA(satBaMV)分离物 satBaMV-TMS1的全基因组特征,明确其系统发育关系;对 BaMV进行 cDNA侵染性克隆构建方法的改进,为其反向遗传学体系的快速建立提供简便的方法.[方法]根据已报道的 BaMV 和 satBaMV 全长序列保守区分别设计2对和1对扩增引物,从感染 BaMV的竹叶中扩增、克隆获得 BaMV-TMS1和 satBaMV-TMS1的全长序列,并进行序列特征分析和系统发育树构建.采用多片段无缝克隆方法将扩增得到的2个病毒 DNA 片段和载体进行连接并转化农杆菌,接种本氏烟后检验其侵染性.[结果]测序获得的 BaMV-TMS1和 satBaMV-TMS1分离物核苷酸序列全长分别为6366和834 nt(不含3'端的多聚腺苷酸尾),具有典型的 BaMV和 satBaMV基因组结构特征.BaMV-TMS1分离物与已报道的其他分离物序列同源性为82%~83%,而satBaMV-TMS1分离物与其他分离物的序列同源性为92%~93%.系统进化树分析表明,BaMV-TMS1分离物可单独形成一簇,satBaMV-TMS1分离物也单独形成一个新的分支.侵染性克隆通过农杆菌注射接种本氏烟10天以后,RT-PCR检测以及透射电镜负染观察结果都验证病毒成功侵染.[结论]BaMV-TMS1和 satBaMV-TMS1分离物与已知序列有着较高的变异度且生成新的系统发育树分支,体现了该病毒与卫星 RNA较高的遗传多样性.本研究成功构建具有生物活性的 BaMV侵染性克隆且构建方法相对简单快速.
竹花叶病毒、卫星RNA、全基因组、系统发育、侵染性克隆
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S763.11(森林保护学)
教育部博士点基金项目20113515110001;福建省自然科学基金项目2014J06011;福建省高校杰出青年科研人才培育计划JA13092;"福建农林大学杰出青年科研人才"培养专项基金项目xjq201402
2017-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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