美国红枫褐斑病病原菌鉴定
【目的】鉴定江西省鄱阳县美国红枫褐斑病的病原，为该病害的防治和进一步研究奠定基础。【方法】实地调查该病害的发生时期和为害程度，对病害症状进行观察记载。随机采集30份不同发病阶段的病叶样品，采用 PDA培养基按照常规组织分离法对其进行病菌分离和菌种纯化。选择代表性菌株 PM-1和 PM-2作为供试菌株，用浓度为1×106个·mL －1的孢子悬浮液对美国红枫健康叶片进行刺伤接种，并对接种发病后病斑进行病菌再分离，以完成柯赫氏法则验证。将各分离菌株接种于 PDA平板中央，于25℃黑暗条件下培养，逐日观察测量菌落大小、颜色、形状、质地及产孢情况等性状。对自然发病寄主上着生的病菌和人工培养的病菌分别制作切片，在显微镜下观察载孢体及分生孢子形态，并测量其大小。根据培养菌落形态特征和病菌形态大小，参考相关文献，对病原菌进行种类归属鉴定。提取病菌基因组 DNA，采用真核生物核糖体基因转录间隔区( ITS)通用引物 ITS1(5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3')和 ITS4(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')对病菌 ITS-5.8S rDNA 区段进行PCR 扩增和序列测定。使用BLAST工具软件，在GenBank中进行序列同源性搜索，并利用MegA 5.2软件中的邻位加入法构建系统发育树，以对病菌进行分子鉴定。【结果】美国红枫褐斑病只为害叶片，5月中旬始发，6月中下旬进入盛发期，重病株发病率达60%以上。病斑常呈圆形、椭圆形或不规则形，中央黄褐色，边缘黑褐色，周围有黄色晕圈，后期病斑常联合成大斑，造成叶片大面积枯死而脱落。在潮湿条件下，在病斑上常形成黑色小点，为病菌的分生孢子盘和分生孢子。共分离获得25个培养性状一致的真菌菌株，菌落正面白色，绒状，平铺，背面淡黄色。分离菌株具有致病性，人工接种发病症状与自然发病症状相同。病菌载孢体为分生孢子盘，直径108～205μm；分生孢子纺锤形，直或微弯，5个细胞，大小(19.3～26.8)μm ×(5.3～6.8)μm；中间3个细胞褐色，长11.9～17.0μm；顶细胞长圆锥形，顶生2～4根不分枝的附属丝，无色透明，长6.3～18.3μm；基细胞无色，具短柄，长1.8～7.5μm。病菌 ITS-rDNA序列长606 nt，与 GenBank中小孢拟盘多毛孢的序列同源性为100%，在系统发育树上，与小孢拟盘多毛孢的亲缘关系也最近。【结论】形态学和分子生物学鉴定结果表明，引起江西省鄱阳县美国红枫褐斑病的病原菌为小孢拟盘多毛孢[Pestalotiopsis microspora ( Speg．) G． C． Zhao ＆ N． Li]，属于子囊菌无性型拟盘多毛孢属真菌。
美国红枫、褐斑病、病原菌鉴定、小孢拟盘多毛孢
S763.15(森林保护学)
国家自然科学基金31160358
2015-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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